酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。
測(cè)任何目標(biāo)蛋白的抗體不止一種,同一家抗體公司可能有好幾種,甚至幾十種。在不同的抗體公司,則更多。那么在眼花繚亂的抗體陣中,如何選擇自己實(shí)驗(yàn)需要的抗體呢?選擇適合實(shí)驗(yàn)的抗體需要綜合考慮多個(gè)因素,包括實(shí)驗(yàn)類型、樣本種屬、抗體的特異性、宿主物種來源以及是否需要熒光標(biāo)記等。
ELISA試劑盒中HRP底物范圍較廣,HRP即辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase)比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以最常用。過氧化物酶作為多個(gè)試劑盒顯色體系的關(guān)鍵成分,對(duì)試劑盒的質(zhì)量有重要影響。辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)的顯色原理基于其酶催化作用(氧化作用)。HRP酶標(biāo)二抗,即辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗,是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常規(guī)用的二抗。其特點(diǎn)包括比活性高、穩(wěn)定性好、分子量小、純酶容易制備等,因此在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。HRP底物主要包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。